تکنیک ایمنوهیستوشیمی IHC

IHC یک تکنیک اساسی است که در آزمایشگاه‌ برای اهداف تشخیصی و پژوهشی استفاده می‌شود. در دهه‌های اخیر، توانایی تشخیص آنتی‌ژن‌ها در مقاطع بافتی به طور چشمگیری افزایش پیدا کرده است . IHC یک مکمل رایج در پاتولوژی، جهت تشخیص مورفولوژی، تحقیقات پاتولوژی و مطالعه فرآیند پاتوژنز بیماری‌ها می‌باشد. تفسیر مناسب یک سنجش ایمونوهیستوشیمی از اهمیت بالایی برخوردار است.
این تکنیک به طور وسیعی در تشخیص ایمونوفنوتیپینگ تومور‌ها در پاتولوژی کاربرد دارد.
ارزیابی ژن‌های اختصاصی بافت‌ها از طریق ایمونوهیستوشیمی، به طور قابل ملاحظه‌ای در طبقه‌بندی تومورها در هر یک از مراحل تشخیصی نقش دارد.



اصول ایمونوهیستوشیمی: (IHC Principle)
اصل ایمونوهیستوشیمی، ردیابی آنتی‌ژن‌ها در برش‌های بافتی با استفاده از آنتی‌بادی‌های کنژوگه شده با مواد فلوروسنت، آنزیم‌ها و عناصر رادیواکتیو می‌باشد. بعد از اتصال آنتی‌بادی کنژوگه شده به آنتی‌ژن هدف در سطح بافت و تولید یک محصول رنگی طی واکنش هیستوشیمی با میکروسکوپ نوری یا میکروسکوپ فلوروکروم و با نور ماوراء بنفش (UV) می‌توان محصول رنگی را که در واقع محل بیان آنتی‌ژن موردنظر است، تشخیص داد .

بافت‌هایی که برای تکنیک رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی استفاده می‌شوند:

رنگ‌آمیزی بافت‌های آغشته به پارافین(Paraffin Embeded Tissue)
اکثر رنگ‌آمیزی‌های ایمونوهیستوشیمی در آزمایشگاه‌های پاتولوژی و فارماکولوژی، روی بافت‌های پارافینه انجام می‌شود و بیشتر پروتکل‌های ایمونوهیستوشیمی مربوط به بافت‌های پارافینه می‌باشد.
رنگ‌آمیزی بافت‌های منجمد شده (frozen tissue):
رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی بافت‌های منجمد کمتر استفاده می‌شود و نکته مهم این روش فیکس کردن سریع و انجماد سریع بافت‌ها بدون تماس با هوای بیرون است.

مراحل کلی رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی بافت‌های پارافینه:
1– تولید آنتی‌بادی مناسب اختصاصی آنتی‌ژن: از طریق تزریق مکرر آنتی‌ژن هدف به حیوان و تحریک سیستم ایمنی تولید می‌شود.
2– استخراج و گرفتن بافت مورد هدف و فیکس کردن آن: گرفتن نمونه بافتی و قرار دادن آن در فیکساتور مناسب.
3– مراحل پردازش بافتی (tissue processing): شامل الکل صعودی (از ۷۰ تا ۱۰۰ ( و آبگیری بافت هدف و تشکیل بلوک‌های پارافینی
4– برش بافت پارافینی و تهیه لام: برش بافت پارافینی نوسط دستگاه میکروتوم انجام می‌گیرد و برش بافتی بعد از قرار گرفتن در حمام آب گرم (دستگاه واتربس) روی لام گذاشته میشود.
5– پارافین‌زدایی و بازآرایی آنتی‌ژن: پارافین‌زدایی با قرار دادن برش‌های بافتی روی حمام آب گرم انجام می‌شود.
6– تیمار لام‌ها با آنتی‌بادی و وآماده‌سازی معرف‌های رنگزا: در این مرحله آنتی‌بادی‌ها را روی لامی که برش بافتی روی آن قرار دارد، رها می‌کنیم و معرف‌های کنژوگه و سوبسترا و کروموژن را به آن اضافه می‌کنیم.
7– بررسی میکروسکوپی لام‌های رنگ‌آمیزی شده: بعد از رنگ‌آمیزی لام‌ها با استفاده از میکروسکوپ فلوروکروم با نور UVV، برش بافتی و موقعیت آنتی‌ژن را در بافت بررسی می‌کنیم.

تکنیک ایمنوهیستوشیمی IHC


کاربردهای تکنیک ایمونوهیستوشیمی:
• تشخیص و درمان تومور‌ها و سلول‌های سرطان
• تشخیص فرآیند تمایز بافت‌ها از طریق شناسایی مارکر‌های سطحی
در تحقیقات و پژوهش‌ها در زمینه پزشکی و دامپزشکی
در تشخیص سرطان‌های اولیه ناشناخته


 

آزمایشگاه در اصفهان- آزمایشگاه تشخیص طبی ، پاتولوژی و سیتولوژی دکتر فولادی اصفهان

 تلفن تماس: 32232910-031

آدرس سایت آزمایشگاه :

www.Fooladilab.ir

برچسب ها:تشخیص و درمان تومور‌ها و سلول‌های سرطان , ایمونوهیستوشیمی در پاتولوژی , تشخیص سرطان‌های اولیه ناشناخته , تشخیص ایمونوفنوتیپینگ تومور‌ها , تشخیص مورفولوژی

تکنیک ایمنوهیستوشیمی IHC

آزمایشگاه در اصفهان

تکنیک ایمنوهیستوشیمی IHC